jueves, 25 de febrero de 2010

Práctica No.6 Determinación de Proteína cruda

A realizarse 24 AL 28 FEBRERO 2014

Práctica No.6 Determinación de Proteína cruda

Introducción


Las proteínas son substancias formadas por aminoácidos, y estos a su vez son compuestos que contienen nitrógeno. Dentro de la composición química de una proteína, aproximadamente el 16% es nitrógeno , este hecho se aprovecha para estimar el contenido de proteína de un ingrediente. Se puede determinar primero su contenido de nitrógeno, y una vez conocido éste, multiplicar el valor obtenido por el factor 6.25 para estimar la cantidad de proteína presente. Es importante señalar que no solo las proteínas contienen nitrógeno en su composición, ya que compuestos como los ácidos nucleicos, la urea, diversas aminas y algunas vitaminas, también lo contienen en cantidades variables.


Fundamento

El método que se utilizará para determinar la cantidad de proteína, es el método Kjeldahl. Este es un método indirecto, realmente lo que se determina es la cantidad de nitrógeno presente en la muestra. Una vez conocido este, al multiplicar la cantidad de nitrógeno obtenida por el factor 6.25, se obtiene la cantidad de proteína cruda del producto. (6.25 resulta de dividir 100/16).


El análisis para determinar el contenido de nitrógeno de la muestra consta de tres fases:

1.-Digestión u oxidación de la materia orgánica.

2.-Destilación de la materia orgánica para desprender el amoníaco que se condensa en una solución ácida.

3.-Titulación de esta solución para determinar el contenido de nitrógeno.

Objetivo

El alumno determinará por el método Kjeldhal la cantidad de nitrógeno presente en una muestra de alimento balanceado, o en un ingrediente usado en alimentación animal para conocer el contenido de proteína cruda presente.

Materiales y equipo requeridos

Aparato digestor-destilador de Kjeldahl.

Balanza analítica.

Matraz Kjeldahl de 800 ml.

Tapón horadado No.7.

Manguera de hule látex (2 tramos de aprox. 20 y 30 cm c/u)

Trampa de humedad.

Matraz Erlenmeyer de 500 ml.

2 Probetas graduada de 100 ml.

Vaso de precipitados de 250 ml.

Soporte Universal

Bureta de 50 ml

Pinza para bureta

Embudo de vidrio

Perlas de vidrio (20)


Reactivos

Ácido sulfúrico concentrado

Mezcla catalizadora (5 g.)

Solución de hidróxido de sodio al 33%. Gránulos de zinc (10)

Solución de ácido bórico al 4%

Solución de ácido clorhídrico 0.1 N

Solución indicadora (rojo de metilo-verde de bromocresol)


Procedimiento


a) Fase de digestión

1.-Pese 1 gramo de muestra (o la cantidad más aproximada) en un papel filtro.

2.-Deposite la muestra dentro del matraz Kjendhal.

3.-Añada 5 gm de la mezcla catalizadora, 25 ml de ácido sulfúrico concentrado y unas 10 perlas de vidrio.

4.-Coloque el matraz Kjeldahl en una de las parrillas de la parte baja del aparato digestor, encender la resistencia y el extractor de gases, dejar oxidar la muestra hasta que tome un color azul verdoso o incoloro, (el color depende de los catalizadores usados, consulte a su instructor), habitualmente esto toma como una hora. Nota: en los primeros minutos del proceso se requiere que le de una rotación ocasional al matraz para permitir que se oxide adecuadamente la muestra.

PRECAUCIÓN: LOS VAPORES QUE SE LIBERAN SON EXTREMADAMENTE TÓXICOS, DEBE DE VIGILAR QUE SE ESTEN EXTRAYENDO DE MANERA APROPIADA HACIA EL EXTERIOR DEL LABORATORIO, DE NO SER ASÍ SUSPENDA EL PROCEDIMIENTO
APAGUE LA PARRILLA Y ABANDONE EL LABORATORIO

5.- Se apaga el digestor y se deja enfriar el matraz, cuando este frío de añaden 200 de agua destilada. Nota: -El análisis.puede suspenderse en este punto, dejando los matraces debidamente tapados.

b) Fase de destilación

6.-Mida con probeta 75 ml de solución de ácido bórico y deposítela en un matraz Erlenmeyer; añada 3-4 gotas de la solución indicadora de rojo metilo-verde bromocresol.

7.-Coloque el tubo de descarga del destilador Kjendhal (consulte a su instructor).

8.- Coloque el matraz Erlenmeyer del paso 6 en la sección de descarga del destilador Kjeldhal..Nota: debe de asegurarse que la punta del tubo de descarga quede bajo la superficie del líquido que contiene el matraz.

9.-Coloque la trampa de humedad con el tapón horadado a la unidad de destilación del aparato Kjeldhal. Nota: Es muy importante que antes haya comprobado que el tapón ajusta perfectamente a la boca del matraz Kjeldahl, para que no vaya a haber fugas cuando inicie la destilación.

10.-Al matraz Kjeldhal (el del paso 5 ) se le añaden 6-7 gránulos de zinc.

11.-Mida en probeta 100 ml de hidróxido de sodio al 33%.

12.-.Incline el matraz Kjeldhal y lentamente y con cuidado añada la solución de hidróxido de sodio. PRECAUCIÓN: NO LO MEZCLE NI AGITE.

13.-Se coloca el matraz Kjendhal en la parrilla de la sección de destilación del aparato Kjeldhal, se le coloca en su boca el tapón horadado que lleva integrada la trampa de humedad.

14.-Abra las llaves del agua del aparato Kjeldahl para que circule y actúe como refrigerante en el condensador.

15.-Encienda la resistencia (aproximadamente en la posición 7).

16..-Agite el contenido del matraz Kjeldahl para mezclar.

NOTA :ES MUY IMPORTANTE QUE COMPRUEBE QUE EL TAPÓN SELLA BIEN LA BOCA DEL MATRAZ, Y QUE NO HAY FUGAS DE VAPOR.

17.-Asegure el matraz Kjeldhal con una pinza doble que tome el cuello del matraz por un lado, y el tubo de refrigeración por el otro.

18.-Destile hasta que se colecten aproximadamente un total de 300 ml en el matraz Erlenmeyer que sirve de receptor (el del paso 8).

19.-Completados los 300 ml se retira el matraz Erlenmeyer del aparato Kjeldahl


c) Fase de titulación.

20.-Coloque en una bureta de 50 ml ácido clorhídrico 0.1 N (hasta que se llene).

21.-Coloque el matraz Erlenmeyer bajo la boca de la bureta.

22.-Se abre la llave de la bureta y con cuidado, gota a gota se añade la solución de ácido clorhídrico (agitando el matraz) hasta que el indicador cambie de color.

23.-Cuando se produzca el cambio de color, cerrar llave de la bureta y anotar con exactitud la cantidad (ml) de ácido que se requirió para ello.



Cálculos.

%Nitrógeno = ml. ácido en titulación * N del ácido (&) * meq del N (#)  * 100
                            ___________________________________________
                                Peso muestra



(&) Consulte con su instructor cual fue la Normalidad  (N) del ácido usado (usualmente es 0.1 N)

(#) Se refiere al miliequivalente químico del Nitrógeno, cuyo valor es de 0.014



% de Proteína cruda = % de Nitrógeno X 6.25



Cuestionario


1.-¿De qué depende la calidad como nutriente de una proteína?.


2.-Explique ¿qué es y cómo se determina el valor biológico de una proteína? .


3.-Investigue ¿qué factor en lugar del 6.25 se emplea para otros ingredientes que se usan en alimentación animal para estimar la cantidad de proteína a partir del porcentaje de nitrógeno?.


4.-¿Cuál es la razón de que para algunos ingredientes el factor usado para estimar la proteína a partir del porcentaje de nitrógeno no sea 6.25 sino otro?.


5.-¿Porque la determinación que usted realizó se llama también determinación de proteína cruda o proteína bruta?.