viernes, 16 de abril de 2010

Práctica No. 12 Determinación de Fósforo

A realizarse 7 AL 11 ABRIL 2014

Práctica No. 12 Determinación de Fósforo

Introducción




El fósforo es un macromineral, es decir es un mineral que se encuentra en cantidad abundante dentro del organismo. La mayor parte del fósforo presente en el organismo se encuentra formando parte de los huesos y dientes en compañía del calcio. Debido a la íntima relación que existe entre calcio y fósforo, en la mayor parte de las especies domésticas se requiere conservar una relación óptima entre ambos minerales a fin de evitar problemas. Otra función importante que desempeña el fósforo, es en el metabolismo de la energía, dado que moléculas como el ATP y otras semejantes contienen fósforo dentro de su molécula. La biodisponibilidad del fósforo es un factor significativo en aspectos nutricionales, debido a que existen ingredientes que aportan un nivel de fósforo alto, pero la cantidad del mismo que está disponible para absorberse y usarse puede ser baja debido a diversos factores, uno de ellos puede ser la presencia de fitatos, elementos presentes en algunas plantas, los cuales fijan al fósforo





Fundamento



El fósforo presente en forma de fosfatos en los alimentos, reacciona con el reactivo llamado molibdato de amonio y metavanadato de amonio lo cual origina un compuesto de color amarillo denominado fosfomolibdovanadato de amonio. La cantidad de compuesto formada es directamente proporcional a la cantidad de fósforo presente en la muestra. La medición de la cantidad de fosfomolibdovanadato formado se mide en un espectrofotómetro calibrado a una longitud de onda de 400 nanómetros.



Objetivo



El alumno cuantificará por el método de espectrofotómetro de luz visible la cantidad de fósforo presente en un alimento completo, un ingrediente o un suplemento usado en alimentación animal para conocer el porcentaje de este mineral que se haya presente en la muestra.





Equipo y materiales requeridos



Mufla eléctrica.

Crisol de porcelana

Embudo de vidrio

Varilla de vidrio

Probeta 100 ml.

Vasos de precipitados 250 ml (2)

Matraz volumétrico de 100 ml.

Matraz volumétrico de 200 ml

Matraz volumétrico de 50 ml

Pipeta volumétrica 10 ml.

Espectrofotómetro de luz normal.

Cubetas para espectrofotómetro

Papel filtro Whatman No.40



Reactivos



Solución de ácido clorhídrico en agua 1 3.

Acido nítrico concentrado.

Solución molibdovanadato de amonio.

Solución patrón de fósforo (1 mg/ml.).



Procedimiento.





1.-Pese con exactitud aproximadamente 2 g. de muestra en un crisol e incine en la mufla a 550 a 600ºC de 4 a 6 horas.



2.-Enfríe el crisol con las cenizas en un desecador (por 20-30 minutos).





3.-Lave las cenizas del crisol con un total de 40 ml. de solución de ácido clorhídrico 1:3, (lave 2 veces usando 2 porciones de 10ml del ácido cada vez, y lave una tercera vez usando los restantes 20 ml). Vacie el contenido de los lavados en un vaso de precipitados de 250 ml, agregar de 6-8 gotas de ácido nítrico concentrado y calentar hasta ebullición.



4.-Transfiera el contenido del vaso de precipitados a un matraz volumétrico de 100 ml, lave los residuos del vaso 3 veces con agua destilada (usando 15 ml cada vez) depositando los lavados en el matraz volumétrico.





5.-Afore el matraz volumétrico hasta 100 ml usando agua destilada. Deje enfriar y en caso de que sea necesario vuelva a aforarlo con agua destilada.



6.-Filtre el contenido del matraz de 100 ml. a un matraz de 200 ml., utilice un embudo de vidrio sobre el cual se haya colocado un papel filtro Whatman No.40. Afore con agua destilada y agite para homogenizar perfectamente el contenido.



7.-De la solución anterior tome 10 ml. con una pipeta volumétrica y transfiéralos a un matraz volumétrico de 50 ml.



8.-Agregue 10 ml. de la solución de molibdovanadato de amonio; afore el matraz con agua destilada y espere 10 minutos antes de efectuar la lectura.



9.-Lea en el espectrofotómetro a una longitud de onda de 400 nm. ya sea en % de transmitancia o en densidad óptica.





10.-Anote la lectura obtenida





11.-Use la gráfica de papel milimétrico elaborada por su instructor utilice la lectura del paso 10 para determinar a que concentración de fósforo (en miligramos) equivale dicha lectura.



Cálculos



% de Fósforo = miligramos de fósforo X aforo final X 100

Alícuota X peso de muestra (en miligramos)



Notas para los cálculos:



Los miligramos de fósforo se obtienen de la gráfica a que hace referencia el paso 11.



El aforo final se refiere al último volumen al cual se realizó la dilución del material original (o sea que representa el volumen especificado según el paso 6 de la práctica. o sea 200 ml).



La alícuota hace referencia a la porción de la dilución que se tomó para realizar la determinación final (en este caso son los 10 ml del paso 8).



NOTAS ADICIONALES:



Preparacion del tubo "blanco"



Sirve para calibrar o ajustar el espectrofotómetro a 100% de transmitancia o a cero de absorbancia, es necesario preparar una solución que contenga todos los reactivos empleados en los tubos de prueba, en las mismas cantidades, pero sin la presencia de fósforo; en lugar de muestra, se agregarán 10 ml. de agua destilada.



Preparacion de la curva patrón



1. Preparación de la solución estandar de fósforo. Se disuelven 8.74 gramos de KH2PO4 en agua, y se diluye a 1 litro con agua destilada (1 ml=2 mg de fósforo). Luego se diluyen 50 ml de la solución anterior a un litro de agua (1 ml=0.1miligramos de fósforo).





2. En matraces aforados de 50 ml. previamente identificados se añaden alícuotas de una solución patrón de fósforo, de tal manera que los matraces del 1 al 9 contengan de 0 a 8 mg. de fósforo (en incrementos de 1 en 1 miligramos), y de 1 y 1.5 mg/ml de fósforo para los 2 últimos matraces.



3. Tome las lecturas de la transmitancia para una muestra procedente de cada matraz, usando el espectrofómetro a 400 nm.



4. Se grafican los resultados en papel milimétrico, de tal forma que la gráfica elaborada relacione los mg de fósforo/ml con la densidad óptica o bien con el % de transmitancia.





Cuestionario





1.-Con excepción de la vaca lechera y la gallina ponedora, ¿cuál es la relación calcio-fósforo más apropiada en los animales domésticos?.



2.-Explique en qué consiste el hiperparatiroidismo nutricional secundario y que lo puede ocasionar.



3.-Mencione las medidas nutricionales que se deben de tomar en cuenta para prevenir la aparición del hiperparatiroidismo nutricional secundario.



4.-Explique que función realiza la fitasa una enzima cuya venta se esta promoviendo para emplearse como un aditivo de los alimentos para animales.